मोनोक्लोनल एंटीबॉडी डाउनस्ट्रीम प्रक्रिया की वायरस सफाई क्षमता पर अध्ययन
सेल लाइनों से प्राप्त जैव प्रौद्योगिकी उत्पादों में वायरस संदूषण का खतरा हो सकता है - सीमा कई कारकों पर निर्भर करती है, जिसमें तैयारी का स्रोत, उपयोग किए गए कच्चे माल, उत्पादन प्रणाली, शुद्धिकरण अभिकर्मक और सहायक पदार्थ शामिल हैं। विनिर्माण प्रक्रिया में वायरस को हटाने या निष्क्रिय करने का अध्ययन रोगजनक वायरस के आईट्रोजेनिक संचरण की क्षमता को कम करने और इस प्रकार जोखिम को कम करने में एक महत्वपूर्ण कदम है, जो उत्पादों की सुरक्षा के लिए आवश्यक है। इससे पहले कि जैविक उत्पाद नैदानिक परीक्षणों में प्रवेश कर सकें और विपणन किया जा सके, उनकी उत्पादन प्रक्रिया को ज्ञात और अनुमानित वायरस को हटाने की क्षमता प्रदर्शित की जानी चाहिए।
01 मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पाद वायरस सुरक्षा मूल्यांकन
वायरस हटाने की क्षमता पर शोध आम तौर पर विभिन्न उत्पादन चरणों में मध्यवर्ती उत्पाद में ज्ञात टिटर संकेतक वायरस को जोड़कर होता है, फिर एक विशिष्ट प्रक्रिया द्वारा उपचारित नमूने में अवशिष्ट वायरस टिटर का निर्धारण करता है, और अंत में लॉग रिडक्शन वैल्यू (एलआरवी) का मूल्यांकन करता है। वायरस टिटर का. LRV के लिए प्रक्रिया चरण 4log10 से अधिक या उसके बराबर आमतौर पर प्रभावी वायरस हटाने वाले चरण माने जाते हैं। एलआरवी के साथ प्रक्रिया<41og10 can be considered as helpful to increase the total virus clearance in the production process. However, due to the limitations of virus verification, the process with LRV≤11og10 has little significance for virus removal, and its LRV value is not included in the total amount of the production process.
सिम्युलेटेड उत्पादन प्रक्रिया (कम प्रक्रिया) की विधि का उपयोग करते समय, जहां तक संभव हो वास्तविक उत्पादन प्रक्रिया, विशेष रूप से प्रभावी उत्पादन प्रक्रिया चरणों से संबंधित एक उचित वायरस हटाने/निष्क्रियता अनुसंधान और परीक्षण योजना तैयार करना आवश्यक है। परीक्षण मापदंडों और नियंत्रण स्थितियों के संदर्भ में सिम्युलेटेड प्रक्रिया वास्तविक प्रक्रिया के साथ सख्ती से सुसंगत होनी चाहिए।
02 आमतौर पर वायरस और सत्यापन योजनाओं को इंगित करता है
सामान्य संकेतक वायरस तालिका 1 में दिखाए गए हैं।
जांचात्मक न्यूड्रग एप्लिकेशन (IND) चरण में, एक बायोटेक उत्पाद को कम से कम 2 मॉडल वायरस के लिए वायरल क्लीयरेंस अध्ययन की आवश्यकता होती है, आमतौर पर एक रेट्रोवायरस (X-MuLV) और एक पार्वोवायरस (MMV) का चयन किया जाता है। बायोलॉजिक्स लाइसेंस एप्लिकेशन (बीएलए) चरण के दौरान, वायरस हटाने के अध्ययन आम तौर पर 3-5 विशिष्ट/गैर-विशिष्ट वायरस का उपयोग करके आयोजित किए जाते हैं और यह प्रदर्शित करने के लिए प्रक्रिया चरणों का मूल्यांकन किया जाता है कि उत्पाद में पर्याप्त सुरक्षा कारक है। वायरस सुरक्षा परिप्रेक्ष्य. देश और विदेश में अलग-अलग दिशानिर्देशों के कारण, घोषणाओं के लिए उपयोग किए जाने वाले वायरस क्लीयरेंस सत्यापन चरणों में कुछ अंतर हैं। एमएबी उत्पादन प्रक्रिया में आमतौर पर उपयोग की जाने वाली वायरस क्लीयरेंस सत्यापन योजनाएं तालिका 2 में दिखाई गई हैं।
03 डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं की वायरस हटाने की क्षमता
3.1 विभिन्न वायरस को हटाने के लिए डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं की क्षमता
2009 तक, आईएनडी और बीएलए के लिए एफडीए को मोनोक्लोनल एंटीबॉडी उत्पाद प्रस्तुत किए गए, प्रोटीन ए एफ़िनिटी क्रोमैटोग्राफी, कम पीएच, आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी एईएक्स (प्रवाह प्रवेश मोड), कटियन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी सीईएक्स (बाइंडिंग - एल्यूशन मोड), और वायरस क्लीयरेंस सत्यापन को छोड़कर वायरस निस्पंदन सबसे अधिक इस्तेमाल किया जाने वाला संकेतक वायरस परिवार है और उनके निकासी प्रभावों का माध्य और सीमा चित्र 1 में दिखाया गया है।
रेट्रोवायरस के लिए, CEX के अपवाद के साथ, जिसका LRV लगभग 3log10 है (जैसा कि चित्र 1 में A-बार चार्ट में दिखाया गया है), अन्य प्रक्रियाएं मजबूत थीं (LRV 4log10 से अधिक या उसके बराबर)। हर्पीसवायरस और रेट्रोवायरस में समान निकासी प्रभाव होते हैं और LRV > 4log10 (जैसा कि चित्र 1 में बी-बार चार्ट में दिखाया गया है)। छोटे अविकसित वायरस, जैसे कि पार्वोवायरस, को प्रभावी ढंग से हटाना अधिक कठिन होता है, रासायनिक उपचार के लिए प्रतिरोधी होते हैं, और फिल्टर द्वारा आसानी से नहीं फंसते हैं (चित्र 1 में सी-बार चार्ट में दिखाया गया है)। केवल AEX और छोटे वायरस फिल्टर पार्वोविरिडे (औसत LRV > 4log10) को हटाने में प्रभावी थे।
चित्र 1 में दिखाई गई प्रक्रियाएँ हैं प्रोटीनए, एईएक्स (प्रवाह प्रवेश मोड), सीईएक्स (संयोजन-क्षालन मोड), कम पीएच निष्क्रियता ("अपूर्ण "बनाम" पूर्ण "निष्कासन), और बड़े और छोटे एपर्चर डिवायरस निस्पंदन।
3.2 वायरस हटाने की क्षमता पर डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं के कारकों को प्रभावित करना
प्रत्येक प्रक्रिया के लिए एलआरवी मूल्यों का वितरण चित्र 2 में दिखाया गया है। 0 ~ 21og10 वाले अध्ययनों को निम्न एलआरवी समूह के रूप में वर्गीकृत किया गया था, और 6log10 से अधिक वाले अध्ययनों को तुलनात्मक विश्लेषण के लिए उच्च एलआरवी समूह के रूप में वर्गीकृत किया गया था।
3.2.1 प्रोटीनए आत्मीयता क्रोमैटोग्राफी
प्रोटीन ए प्रक्रिया के एलआरवी मान और बैलेंस/वॉश बफर, फिलर, एलुएंट संरचना और एलुएंट पीएच मान के बीच कोई महत्वपूर्ण संबंध नहीं था। निम्न एलआरवी समूह का सामान्य भाजक यह है कि फीडस्टॉक काफी जटिल है, और यह हो सकता है कि फीडस्टॉक और फिलर की जटिल बातचीत वायरस को हटाने के लिए क्रोमैटोग्राफिक कॉलम की क्षमता को नकारात्मक रूप से प्रभावित करती है।
3.2.2 AEX (फ्लो थ्रू मोड)
स्ट्रॉस एट अल. पता चला कि AEX नमूनों का pH और चालकता LRV को प्रभावित कर सकती है। हालाँकि, मिसेगास एट अल के सांख्यिकीय परिणामों से पता चला कि, प्रोटीनए के समान, एईएक्स (प्रवाह प्रवेश मोड) के एलआरवी का विभिन्न बफ़र्स, फिलर्स, पीएच और चालकता के साथ कोई महत्वपूर्ण संबंध नहीं था, जो पीएच और चालकता के अनुकूलन के कारण हो सकता है। रिपोर्ट किए गए मामले में प्रक्रिया की शर्तें।
3.2.3 सीईएक्स (बाइंडिंग - एल्यूशन मोड)
CEX प्रक्रिया द्वारा वायरस हटाना पर्याप्त मजबूत नहीं है। उच्च एलआरवी समूह में एलआरवी और बफर, अनुभव स्तर, या किसी क्रोमैटोग्राफिक कॉलम गुण, जैसे कॉलम ऊंचाई और राल प्रकार के बीच कोई महत्वपूर्ण संबंध नहीं था। हालाँकि, उच्च एलआरवी अध्ययन में उपयोग किए गए संतुलन/लोडिंग और रेफरेंस पीएच मान दोनों कम थे, 5.3±0.2 पर; निम्न एलआरवी समूह में, पीएच 6 था। एक अन्य कारक यह है कि बफर में नमक की सघनता भी एलआरवी मूल्य अंतर का कारण बन सकती है। कम एलआरवी अध्ययन में उपयोग किए गए बफर में नमक की सांद्रता अधिक थी, लोडिंग/बैलेंसिंग समाधान में 290±120 मिमी की औसत सांद्रता और एलुएंट में 340±70 मिमी थी, जबकि उच्च एलआरवी अध्ययन में NaCl की सांद्रता 58 थी। क्रमशः ±27 मिमी और 183±31 मिमी।
3.2.4 निम्न पीएच निष्क्रियता
निम्न पीएच प्रक्रिया में, पीएच एक प्रमुख प्रक्रिया पैरामीटर है, और 3.8 का पीएच डिग्री के अनुसार रेट्रोवायरस को निष्क्रिय करने के लिए पर्याप्त है। निम्न एलआरवी समूह का पीएच 3.9 था, जबकि उच्च एलआरवी अध्ययन का पीएच 3.4 था।
3.2.5 वायरस फ़िल्टरिंग हटाना
छोटे और बड़े एपर्चर फिल्टर दोनों के लिए, MuLV निष्कासन का LRV मान 2log10 से कम नहीं था, और केवल 1% अध्ययन 3log10 से नीचे थे (चित्र 2 में h और i कॉलम में दिखाया गया है)। बड़े एपर्चर वायरस फिल्टर द्वारा रेट्रोवायरस की समग्र निकासी छोटे एपर्चर वायरस फिल्टर की तुलना में कम थी (जैसा कि चित्र 1 में सी-बार चार्ट में दिखाया गया है)। पार्वोवायरस हटाने के परिणाम को प्रभावित करने वाला मुख्य कारण विभिन्न फ़िल्टर प्रकार हैं। सामान्य तौर पर, एंटी-वायरस फ़िल्टरिंग विश्वसनीय रूप से वायरस को हटा सकती है।
प्रक्रियाएं हैं प्रोटीन ए(ए), एईएक्स प्रवेश मोड (बी), सीईएक्स बाइंडिंग - रेफरेंस मोड (सी), एईएक्स बाइंडिंग Ⅰ रेफरेंस मोड (डी), कम पीएच निष्क्रियता ("अपूर्ण" और "पूर्ण" निकासी)(ई ~ जी), और बड़े छिद्र आकार (एच) और छोटे छिद्र आकार (आई ~ जे) डीवायरस निस्पंदन (जहां, ए ~ आई: रेट्रोवायरस; जे: पारवोवायरस)।
04 वायरस सुरक्षा मूल्यांकन में नवाचार और चुनौतियाँ
डाउनस्ट्रीम बायोफार्मास्युटिकल प्रक्रियाओं के क्षेत्र में निरंतर विकास और नवाचार अनिवार्य रूप से वायरस क्लीयरेंस मूल्यांकन में नवाचार लाएगा। अपस्ट्रीम और डाउनस्ट्रीम प्रक्रियाओं में प्रगति - जैसे कि निरंतर स्ट्रीम बायोप्रोसेस - ने प्रभावी और मजबूत वायरस हटाने की प्रक्रियाओं का आकलन और स्थापित करना आवश्यक बना दिया है। निरंतर प्रवाह के दौरान, वायरस निष्क्रियता और वायरस फ़िल्टरिंग जैसे कदम अभी भी बैच मोड में किए जाने की उम्मीद है। यद्यपि निरंतर प्रवाह मोड में क्रोमैटोग्राफ़िक प्रक्रियाओं की वायरस हटाने की क्षमता बैच प्रोसेसिंग से काफी भिन्न नहीं होनी चाहिए, इसे डेटा द्वारा समर्थित होना चाहिए।
05 आउटलुक
वायरोलॉजिकल सुरक्षा परिप्रेक्ष्य से, बायोफार्मास्युटिकल उद्योग की उत्कृष्ट सुरक्षा को मोटे तौर पर वायरल सुरक्षा के लिए तीन प्रमुख रणनीतियों के उद्योग के सख्त पालन के लिए जिम्मेदार ठहराया जा सकता है: सामग्री और सेल बैंक स्रोतों की पर्याप्त सोर्सिंग और परीक्षण, वायरल क्लीयरेंस आकलन (वायरस सत्यापन अध्ययन) का दस्तावेजीकरण, और प्रक्रियाधीन वायरल परीक्षण। नवीन सेल सब्सट्रेट्स द्वारा उत्पादित जैविक दवाओं की विशेषताएं विभिन्न जोखिमों के साथ बदल सकती हैं, और जैविक दवाओं की सुरक्षा सुनिश्चित करने के लिए अच्छी जोखिम प्रबंधन रणनीतियों की आवश्यकता होती है। गाइडलिंग टेक्नोलॉजी के पास अनुभवी पेशेवर तकनीकी टीम है, जो छोटे परीक्षण, पायलट परीक्षण से लेकर बड़े पैमाने पर उत्पादन तक निस्पंदन प्रक्रिया को कवर करती है, हमारे झिल्ली और झिल्ली फिल्टर व्यापक रूप से पूर्व-निस्पंदन, माइक्रोफिल्ट्रेशन, अल्ट्राफिल्ट्रेशन, नैनोफिल्ट्रेशन एकाग्रता, निष्कर्षण और पृथक्करण में उपयोग किए जाते हैं; हमारी कई उत्पाद शृंखलाएं, छोटे एकल-उपयोग प्रयोगशाला निस्पंदन से लेकर उत्पादन-उन्मुख निस्पंदन सिस्टम, बाँझपन परीक्षण, किण्वन, सेल संस्कृति और बहुत कुछ, बढ़ी हुई उत्पादकता सुनिश्चित करती हैं।
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