पोर्सिन डायरिया वैक्सीन की डाउनस्ट्रीम शुद्धिकरण प्रक्रिया

डायरिया उन तीन प्रमुख बीमारियों में से एक है जिसने चीन में सुअर उद्योग को भारी आर्थिक नुकसान पहुंचाया है। सूअरों में दस्त पैदा करने वाले कई कारक हैं, और वायरल कारक सबसे गंभीर हैं। सभी उम्र के सूअर संक्रमित हो सकते हैं, विशेषकर दूध पीने वाले सूअर के बच्चे, और संक्रमण के बाद मृत्यु दर 50% से अधिक तक पहुंच सकती है। पोर्सिन महामारी डायरिया वायरस (पीईडीवी) और पोर्सिन ट्रांसमिसिबल गैस्ट्रोएंटेराइटिस वायरस (टीजीईवी) दुनिया में व्यापक हैं, और दोनों वायरस अकेले या संयोजन में संक्रमित हो सकते हैं। वर्तमान में, PEDV और TGEV के इलाज के लिए कोई विशिष्ट दवाएं नहीं हैं, और पोर्सिन डायरिया की रोकथाम और नियंत्रण मुख्य रूप से व्यावसायिक टीके हैं।

पोर्सिन महामारी डायरिया के पारंपरिक टीकों में मुख्य रूप से संपूर्ण वायरस निष्क्रिय टीका और जीवित क्षीण टीका शामिल हैं। चिकित्सकीय रूप से, पीईडीवी और टीजीईवी अग्रानुक्रम निष्क्रिय टीका या क्षीण टीका, और पीईडीवी, टीजीईवी और पोर्सिन रोटावायरस (आरवी) ट्रिपल निष्क्रिय टीका या क्षीणित टीका आमतौर पर उपयोग किया जाता है, ज्यादातर पीईडीवी और टीजीईवी अग्रानुक्रम टीका।

वर्तमान में, चीन में सुअर महामारी दस्त के खिलाफ कई टीके उपलब्ध हैं।

निष्क्रिय और क्षीण टीकों की उत्पादन प्रक्रिया समान है, जिसमें मुख्य रूप से रोगज़नक़ संस्कृति, रोगज़नक़ निष्क्रियता या क्षीणन, रोगज़नक़ निष्कर्षण और शुद्धिकरण, टीका तैयारी और पैकेजिंग, और टीका गुणवत्ता नियंत्रण के पांच चरण शामिल हैं। यह लेख मुख्य रूप से रोगज़नक़ शुद्धिकरण की प्रक्रिया का परिचय देता है।

स्पष्टीकरण

स्पष्टीकरण का उद्देश्य कोशिका मलबे और अन्य बड़े कण समुच्चय को हटाना सुनिश्चित करना है। विभिन्न प्रकार के जहर के सेल कल्चर उत्पादन में, बड़ी संख्या में वायरस कणों के अलावा, कई सेल ऊतक मलबे और चयापचय उत्पाद और अन्य अशुद्धियाँ होती हैं, जिससे जहर बादल या अर्ध-बादल की स्थिति में प्रत्यक्ष हो जाता है। इस जहर सांद्रता ऑपरेशन के उपयोग से जल्द ही अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली अवरुद्ध हो जाएगी, और जहर की सांद्रता पूरी नहीं हो सकेगी, और परिणामस्वरूप अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली स्क्रैप हो जाएगी। इसलिए, जहर को केंद्रित करने से पहले, इसे पहले स्पष्ट किया जाना चाहिए, जो आमतौर पर कम गति वाले सेंट्रीफ्यूजेशन और झिल्ली निस्पंदन द्वारा किया जाता है। यह ध्यान दिया जाना चाहिए कि झिल्ली पृथक्करण तकनीक का उपयोग करते समय, झिल्ली सामग्री अक्सर इलेक्ट्रोनगेटिविटी या हाइड्रोफोबिक समूहों के साथ होती है, यह जांचना आवश्यक है कि झिल्ली की सामग्री में वायरस कणों का सोखना है या नहीं।

एक कुशल स्पष्टीकरण कदम के लिए उच्च ठोस कण हटाने की क्षमता और उच्च उत्पाद उपज, आसान प्रवर्धन और बाद में डाउनस्ट्रीम ऑपरेटिंग इकाइयों की सुरक्षा के संयोजन की आवश्यकता होती है। वर्तमान में, स्पष्टीकरण ऑपरेशन के लिए डीप फिल्टर का उपयोग किया जाता है।

हालाँकि, जब खेती का पैमाना बहुत बड़ा होता है, तो बड़ी संख्या में गहरे फिल्टर झिल्ली की आवश्यकता होगी, जिसके परिणामस्वरूप उपभोग्य सामग्रियों की लागत में काफी वृद्धि होगी। साथ ही, सेल कल्चर का उच्च घनत्व गहरे फिल्टर झिल्ली के भार को कम कर देगा, जिसके परिणामस्वरूप लागत में वृद्धि होगी और उत्पाद का अत्यधिक पतलापन होगा।

माइक्रोफिल्ट्रेशन विधि मुख्य रूप से स्पर्शरेखा प्रवाह निस्पंदन उपकरण का उपयोग करती है, और झिल्ली घटक फ्लैट झिल्ली कैसस्टे और खोखले फाइबर होते हैं। स्पर्शरेखा प्रवाह निस्पंदन (टीएफएफ) ट्रांसमेम्ब्रेन दबाव अंतर से संचालित होता है। झिल्ली छिद्र के आकार से छोटे पदार्थ और अशुद्धियाँ झिल्ली से होकर गुजरती हैं, जबकि बड़े कणों वाली कोशिकाएँ जैसी अशुद्धियाँ फंस जाती हैं। माइक्रोफिल्ट्रेशन के लिए उपयोग की जाने वाली झिल्ली का छिद्र आकार {{0}}.45/0.22μm है। खोखले फाइबर स्पर्शरेखा प्रवाह माइक्रोफिल्टरेशन सीधे उच्च ठोस सामग्री वाले तरल को संसाधित कर सकता है, जैसे कि उच्च घनत्व सेल संस्कृति माध्यम, कम चरणों और सरल ऑपरेशन के साथ सेंट्रीफ्यूजेशन और पूर्व-निस्पंदन चरणों को खत्म कर सकता है, झिल्ली को सफाई के माध्यम से बार-बार उपयोग किया जा सकता है, उपकरण निवेश और संचालन को कम किया जा सकता है मॉड्यूलर स्वचालित उत्पादन की आवश्यकताओं के अनुरूप लागत।

एकाग्रता एवं शुद्धि

प्रारंभिक स्पष्टीकरण के बाद, वायरस कल्चर माध्यम में अभी भी बड़ी संख्या में अशुद्धियाँ हैं, जिनमें दोषपूर्ण कण, वायरल शेल, साइटोटॉक्सिन, माध्यम, सीरम और कोशिका के टुकड़े आदि शामिल हैं। यदि इन अशुद्धियों को जानवरों में इंजेक्ट किया जाता है, तो वे न केवल प्रभावकारिता को प्रभावित करेंगे। टीका, लेकिन मेजबान की एक मजबूत प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का कारण भी बनता है, और यहां तक ​​कि टीका लगाए गए जानवरों की मृत्यु भी हो सकती है। इसलिए, हेटरोप्रोटीन और कोशिका के टुकड़ों जैसी अशुद्धियों को दूर करने, प्रभावी प्रतिरक्षा प्रतिक्रियाओं को बढ़ाने और प्रेरित करने, इस्तेमाल की जाने वाली वैक्सीन की मात्रा को कम करने और प्रतिकूल प्रतिक्रियाओं को कम करने के लिए एकाग्रता और शुद्धि की आवश्यकता होती है।

वायरस शुद्धिकरण का सिद्धांत: वायरस की जैविक गतिविधि और संक्रामकता को आधार के रूप में बनाए रखना, वायरस की अशुद्धियों को दूर करना और वायरस की उच्च शुद्धता को निकालना।

वर्तमान में, बड़े पैमाने पर उत्पादन में उपयोग की जाने वाली मुख्य एकाग्रता और शुद्धिकरण विधियां अल्ट्राफिल्ट्रेशन हैं।

अल्ट्राफिल्ट्रेशन विधि, मुख्य रूप से स्पर्शरेखा प्रवाह अल्ट्राफिल्ट्रेशन डिवाइस, खोखले फाइबर निस्पंदन सिस्टम और अन्य निस्पंदन उपकरण का उपयोग करती है, सामान्य परिस्थितियों में, अल्ट्राफिल्ट्रेशन विधि का अनुप्रयोग वायरस को 100 गुना से अधिक केंद्रित कर सकता है, हेटरोप्रोटीन की हटाने की दर 99% तक हो सकती है। उनमें से, खोखले फाइबर झिल्ली निस्पंदन तकनीक में हल्के और कम कतरनी बल, आसान प्लगिंग, लचीला संचालन, लंबे जीवन और कम लागत और आसान प्रवर्धन के फायदे हैं, इसलिए वायरस एकाग्रता और शुद्धिकरण के लिए खोखले फाइबर को चुनने की सिफारिश की जाती है।

जब एकाग्रता और शुद्धिकरण के लिए अल्ट्राफिल्ट्रेशन विधि का उपयोग किया जाता है, तो उचित झिल्ली छिद्र आकार का चयन करना बहुत महत्वपूर्ण है, जो सीधे एकाग्रता की दक्षता और गुणवत्ता निर्धारित करता है। एक ओर, उपज सुनिश्चित करने के लिए लक्ष्य अणुओं को प्रभावी ढंग से फंसाने के लिए झिल्ली एपर्चर का चयन करना आवश्यक है, और दूसरी ओर, हेटरोप्रोटीन के निष्कासन प्रभाव और प्रसंस्करण गति पर पूरी तरह से विचार किया जाना चाहिए। इसलिए, सबसे अच्छा सिद्धांत सबसे बड़े छिद्र आकार के साथ झिल्ली का चयन करना है जो लक्ष्य अणु को फंसा सकता है, और समान छिद्र आकार वितरण के साथ फिल्टर झिल्ली का चयन करने का प्रयास करें।

पोर्सिन एपिडेमिक डायरिया वायरस (पीईडीवी) और ट्रांसमिसिबल गैस्ट्रोएंटेराइटिस वायरस (टीजीईवी) दोनों कोरोना वायरस हैं, जो बहुरूपी गोले हैं, जिनमें उलटी स्पाइक जैसी स्पाइक्स होती हैं, जिनका व्यास 60 से 190 एनएम तक होता है। रोटावायरस रोग एक ज़ूनोटिक रोग है जिसमें रोटावायरस (आरवी) पहिये जैसा दिखता है और इसका व्यास लगभग 70 एनएम है। इन तीन वायरस को आम तौर पर 100-750kd एपर्चर अल्ट्राफिल्ट्रेशन झिल्ली का उपयोग करके रोका जा सकता है।

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