अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का रखरखाव और उपयोग विधि

अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का रखरखाव और उपयोग विधि

अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का कार्य:

1) एकाग्रता; 2) अलवणीकरण; 3) बफर बदलें; 4) इसमें आंशिक शुद्धिकरण का प्रभाव होता है।

1. नई अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब को अन्य उपचार के बिना सीधे इस्तेमाल किया जा सकता है;

2. अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब को उच्च तापमान पर निष्फल नहीं किया जा सकता है;

3. केंद्रित प्रोटीन बदलते समय अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का उपचार

अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का पुन: उपयोग किया जा सकता है। इसे 0.1M NaOH में 1-2 घंटे के लिए भिगो दें, इसे पानी से धो लें, और फिर इसे प्रासंगिक घोल (निष्फल पानी या पीबीएस) से 3 बार अपकेंद्रित्र पर धो लें, जिसका उपयोग नए प्रोटीन को केंद्रित करने के लिए किया जा सकता है;

4. सामान्य रूप से रखी गई अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का उपचार

अक्सर उपयोग की जाने वाली अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब के लिए, इसे 0.1M NaOH में 1-2 घंटे के लिए भिगोएँ, पानी से धोएँ और निष्फल पानी में भिगोएँ। फिल्टर झिल्ली को गीला रखना सुनिश्चित करें और बैक्टीरिया को बढ़ने से रोकें;

5. अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का उपचार लंबे समय तक रखा जाता है

यदि अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब का उपयोग लंबे समय तक नहीं किया जाता है, तो इसे 0.1M NaOH में 1-2 घंटे के लिए भिगो दें, इसे पानी से धो लें, और इसे भंडारण के लिए 20 प्रतिशत इथेनॉल में भिगो दें। फिल्टर झिल्ली को गीला रखना सुनिश्चित करें और बैक्टीरिया को बढ़ने से रोकें;

6. अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब के लिए उपयोग की जाने वाली केन्द्रापसारक गति

केन्द्रापसारक गति आम तौर पर 4000rpm है (आमतौर पर 3000 ग्राम की सिफारिश की जाती है, और अधिकतम 4000 ग्राम से अधिक नहीं हो सकती)। 5-8 मिनट के लिए सेंट्रीफ्यूजेशन के बाद, 4ml नमूने को 1ml से कम से कम दर्जनों माइक्रोलीटर तक केंद्रित किया जा सकता है; यदि गति बहुत अधिक है, तो लक्ष्य प्रोटीन गिर जाएगा, जिसके परिणामस्वरूप लक्ष्य प्रोटीन का नुकसान होगा; कम गति, समय लेने वाली और कम कार्य कुशलता;

7. सावधानियां जब गन हेड अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब में फैलती है

अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब में प्रोटीन समाधान या बफर जोड़ते समय, ब्लू गन हेड का उपयोग किया जा सकता है; हालांकि, जब केंद्रित लक्ष्य प्रोटीन अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब के नीचे से अवशोषित हो जाता है, तो पीले बंदूक के सिर का उपयोग किया जाना चाहिए; जब बंदूक के सिर को अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब में डाला जाता है, तो फिल्टर झिल्ली को पंचर करने से बचने के लिए इसे फिल्टर झिल्ली को छूने से रोका जाना चाहिए;

8. अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब के प्रोटीन सोखना नुकसान को कम करें

अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब की झिल्ली प्रोटीन को सोख सकती है, जिससे लक्ष्य प्रोटीन लगभग 30 प्रतिशत कम हो जाएगा; प्रोटीन हानि को कम करने के लिए, लक्ष्य प्रोटीन समाधान को अवशोषित करने के बाद, फिल्टर झिल्ली द्वारा अधिशोषित अधिकांश प्रोटीन को धोने और लक्ष्य प्रोटीन के नुकसान को कम करने के लिए प्रोटीन बफर के साथ अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब के निचले हिस्से को शुद्ध करें; यदि शुद्ध प्रोटीन केंद्रित है, तो ध्यान दें कि केंद्रित मात्रा बहुत छोटी नहीं होनी चाहिए; आम तौर पर, कोई फर्क नहीं पड़ता कि कैसे अपकेंद्रित्र, लगभग 200 µ एल प्रोटीन समाधान तल पर रखा जाएगा;

9. अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब की विफलता को कैसे परिभाषित करें

सामान्य उपयोग के तहत, जब फिल्टर झिल्ली को पंचर नहीं किया जाता है, तो केंद्रित प्रोटीन समाधान में प्रोटीन नहीं होता है या मात्रा बहुत कम होती है (लक्ष्य प्रोटीन सहित), जबकि पहले फ़िल्टर किए गए समाधान में लक्ष्य प्रोटीन होता है, यह इंगित करता है कि फ़िल्टर झिल्ली अमान्य है और एक नई अल्ट्राफिल्ट्रेशन ट्यूब के साथ प्रतिस्थापित करने की आवश्यकता है।