क्यू मजबूत आयनों झिल्ली क्रोमैटोग्राफी
1.अवलोकन आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी एक शुद्धिकरण तकनीक है जो बायोमोलेक्यूल्स को उनके चार्ज गुणों और चार्ज मात्रा में अंतर के आधार पर अलग करती है। चूंकि अधिकांश जैविक मैक्रोमोलेक्यूल्स में कार्बोक्सिल या हाइड्रॉक्सिल समूह होते हैं, इसलिए उनकी चार्ज विशेषताओं और परिमाण को समायोजित किया जा सकता है...
उत्पाद का परिचय
1.अवलोकन
आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी एक शुद्धिकरण तकनीक है जो बायोमोलेक्यूल्स को उनके चार्ज गुणों और चार्ज मात्रा में अंतर के आधार पर अलग करती है। चूंकि अधिकांश जैविक मैक्रोमोलेक्यूल्स में कार्बोक्सिल या हाइड्रॉक्सिल समूह होते हैं, इसलिए बफर समाधान के पीएच मान को नियंत्रित करके उनकी चार्ज विशेषताओं और परिमाण को समायोजित किया जा सकता है। बायोमोलेक्यूल्स को विपरीत रूप से चार्ज किए गए आयन या धनायन विनिमय माध्यम से बांधने के बाद, मोबाइल चरण की आयनिक ताकत या पीएच को बदलकर पृथक्करण प्राप्त किया जाता है, जिससे कमजोर रूप से बंधे अणु पहले कमजोर हो जाते हैं, उसके बाद दृढ़ता से बंधे अणु आते हैं।
2. उत्पाद लाभ
2.1 तेज और कुशल - पारंपरिक रेजिन की तुलना में 40 गुना तेज प्रवाह दर पर उच्च बंधन क्षमता प्राप्त करता है। पैक्ड बिस्तर क्रोमैटोग्राफी की तुलना में, झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करने की प्रक्रिया का समय 30-40 गुना कम हो जाता है। सामान्य परिचालन प्रवाह दर 10 एमवी/मिनट है।
2.2 उच्च बाइंडिंग दक्षता - झिल्ली क्रोमैटोग्राफी कम दबाव ड्रॉप स्थितियों के तहत उच्च लोडिंग क्षमता और उच्च प्रवाह दर प्रदर्शित करती है, जिससे चार्ज किए गए बायोमोलेक्यूल्स को एक ही पास में कैप्चर करने की अनुमति मिलती है।
2.3 स्केलेबल और लचीली - झिल्ली क्रोमैटोग्राफी उत्पादों की पूरी श्रृंखला बायोमैक्रोमोलेक्यूल शुद्धिकरण की विविध आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है, जो प्रक्रिया विकास से लेकर बड़े पैमाने पर उत्पादन तक सभी चरणों को कवर करती है। कैप्सूल प्रकार का संरचनात्मक डिज़ाइन एकल उपयोग संचालन और सफाई के बाद पुन: उपयोग दोनों का समर्थन करता है।
2.4 उत्पादकता में सुधार - कॉम्पैक्ट डिज़ाइन सुविधा पदचिह्न को कम करता है। कॉलम पैकिंग, सफाई, सफाई सत्यापन और कॉलम भंडारण संचालन को समाप्त करके, प्रक्रिया को संतुलन के लिए कम बफर की आवश्यकता होती है और इसे कॉलम की तैयारी के बिना सीधे किया जा सकता है। श्रम लागत को 50% तक कम किया जा सकता है।
3. तकनीकी पैरामीटर
3.1 संरचनात्मक सामग्री
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लैब स्केल |
छोटे पैमाने पर |
पायलट स्केल |
उत्पादन का पैमाना |
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झिल्ली की मात्रा |
0.2 मि.ली |
5 मि.ली |
140 मि.ली |
5L |
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झिल्ली समर्थन संरचना: |
पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) |
|||
|
झिल्ली आवास |
पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) |
|||
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हे अंगूठी |
सिलिकॉन |
|||
3.2 परिचालन विशेषताएँ
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लैब स्केल |
छोटे पैमाने पर |
पायलट स्केल |
उत्पादन का पैमाना |
|
|
झिल्ली की मात्रा |
0.2ml |
5 मि.ली |
400 मिलीलीटर |
5L |
|
अनुशंसित प्रवाह दर |
1-6 मि.ली./मिनट |
25-150 मि.ली./मिनट |
2-12L/मिनट |
25-150L/मिनट |
|
अधिकतम परिचालन तापमान |
35 डिग्री |
|||
|
अधिकतम परिचालन दबाव |
3बार(25 डिग्री) |
|||
|
अधिकतम दबाव अंतर |
3बार(25 डिग्री) |
|||
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जमा करने की अवस्था: |
20% इथेनॉल जलीय घोल |
|||
क्यू झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का सेवा जीवन एगरोज़ जेल क्रोमैटोग्राफी के बराबर है।
चित्र 1. बीएसए द्वारा मॉनिटर किए गए कई उपयोगों के बाद झिल्ली क्रोमैटोग्राफी लोडिंग क्षमता में परिवर्तन
इसके अतिरिक्त, हमने मेजबान कोशिका प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड के लिए झिल्ली क्रोमैटोग्राफी की निष्कासन दक्षता का मूल्यांकन किया। परिणाम इस प्रकार हैं।
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|
डीएनए |
एच.सी.पी |
|||||
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|
आईजीजी रिकवरी |
आरटी पीसीआर द्वारा सामग्री (आईजीजी का पीजी/मिलीग्राम)। |
निष्कासन कारक |
एलिसा द्वारा सामग्री (आईजीजी का एनजी/मिलीग्राम)। |
निष्कासन कारक |
||
|
दौड़ना |
% |
क्यू मेम्ब्रेन से पहले |
Q झिल्ली के बाद |
लकड़ी का लट्ठा |
क्यू मेम्ब्रेन से पहले |
Q झिल्ली के बाद |
लकड़ी का लट्ठा |
|
1 |
96.7 |
423 |
1.2 |
2.55 |
7 |
4.8 |
0.16 |
|
2 |
97.4 |
438 |
1.3 |
2.53 |
7 |
4.9 |
0.15 |
|
3 |
94.7 |
513 |
1.3 |
2.60 |
6 |
1.9 |
0.50 |
|
4 |
95 |
32 |
0.9 |
1.55 |
6 |
4.2 |
0.15 |
|
5 |
96.3 |
45 |
1.1 |
1.61 |
8 |
5.2 |
0.19 |
|
6 |
96.5 |
158 |
0.7 |
2.35 |
8 |
6.2 |
0.11 |
|
7 |
96.4 |
267 |
1.9 |
2.15 |
9 |
7.2 |
0.10 |
|
8 |
96.8 |
298 |
2.3 |
2.11 |
9 |
8.2 |
0.04 |
|
9 |
97.1 |
746 |
1.5 |
2.70 |
4 |
2 |
0.30 |
|
10 |
96.6 |
39 |
1 |
1.59 |
4 |
1.5 |
0.43 |
तालिका 1. क्यू झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करके व्यक्त आईजीजी सामग्री सीएचओ में डीएनए और मेजबान सेल प्रोटीन को हटाने की दर
प्रयोगों की एक श्रृंखला ने प्रदर्शित किया कि क्यू झिल्ली क्रोमैटोग्राफी उच्च लक्ष्य आईजीजी रिकवरी को बनाए रखते हुए प्रभावी ढंग से अशुद्धियों को दूर कर सकती है।
इसके अलावा, हमने आयातित ब्रांडों के साथ गुडिलिंग झिल्ली क्रोमैटोग्राफी की तुलना की, और लोडिंग क्षमता डेटा इस प्रकार है:
|
लोडिंग क्षमता (मिलीग्राम/एमएल) |
Sartorius |
कष्ट देना |
मार्गदर्शन |
|
बीएसए |
29 |
60 |
45 |
|
एसओडी |
25 |
40 |
35 |
|
प्रोटीन ए |
27 |
45 |
40 |
|
ट्रिप्सिन |
30 |
56 |
44 |
तालिका 2. हमारे उत्पाद और प्रतिस्पर्धी उत्पादों पर विभिन्न प्रोटीनों का प्रदर्शन लोड हो रहा है
समग्र मूल्यांकन से पता चलता है कि हमारी लोडिंग क्षमता आयातित उत्पादों के बराबर है,
चित्र 2.क्यू झिल्ली क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल का उपयोग करते हुए, बीएसए को बाइंडिंग क्षमता का मूल्यांकन करने के लिए मानक प्रोटीन के रूप में उपयोग किया गया था। गतिशील बाइंडिंग क्षमता की तुलना आयातित उत्पादों से की गई। परिणामों से पता चला कि अधिकांश लक्ष्य प्रोटीन को पकड़ा जा सकता है और उससे निबटा जा सकता है150 एमएम NaClबीएसए को मॉडल प्रोटीन के रूप में उपयोग करते समय।
विभिन्न रेफरेंस स्थितियों के माध्यम से, हमने पाया कि झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का रेफरेंस व्यवहार एगरोज़ जेल क्रोमैटोग्राफी के समान है। अलग-अलग नमक सांद्रता में उत्सर्जित प्रोटीन की शुद्धता काफी भिन्न होती है। वास्तविक प्रक्रिया विकास और उत्पादन में, उच्च शुद्धता के साथ लक्ष्य प्रोटीन प्राप्त करने के लिए इष्टतम निक्षालन स्थितियों को मात्रात्मक रूप से निर्धारित करना आवश्यक है।
4．विशिष्ट अनुप्रयोग मामला
डीएनए, वायरस, मेजबान सेल प्रोटीन (एचसीपी), और एंडोटॉक्सिन को हटाना
प्लास्मिड, वायरस और प्रोटीन को पकड़ना, साथ ही ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स का शुद्धिकरण
5. संचालन प्रक्रिया
5.1:उपकरण तैयारी और संयोजन:
5.1.1: AKTA क्रोमैटोग्राफी प्रणाली: झिल्ली क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल को पैक्ड कॉलम के समान तरीके से स्थापित करें। सुनिश्चित करें कि मॉड्यूल पर तीर की दिशा फ़ीड प्रवाह दिशा के अनुरूप है। ल्यूअर कनेक्टर्स या ट्राई-क्लैंप फिटिंग्स का उपयोग करके सिस्टम को कनेक्ट करें।
5.1.2 इनलेट प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और सिस्टम से हवा निकालने के लिए संतुलन बफर का उपयोग करें। यह सुनिश्चित करने के बाद कि आउटलेट स्ट्रीम में कोई हवा के बुलबुले नहीं हैं, पर्मिट आउटलेट को क्रोमैटोग्राफी सिस्टम से कनेक्ट करें।
5.2:पूर्व-उपयोग उपचार:
5.2.1:
Set the inlet flow rate to 5–10 MV/min and perform pre-treatment with 0.5 M NaOH at >यह सुनिश्चित करने के लिए कि झिल्ली संतुलन तक पहुँच जाए 5 एमवी।
5.2.2:
At the same flow rate, perform pre-treatment with 1 M NaCl at >यह सुनिश्चित करने के लिए कि झिल्ली संतुलन तक पहुँच जाए 5 एमवी।
5.3 क्रोमैटोग्राफी प्रक्रिया
5.3.1 Set the feed flow rate to 5–10 MV/min and perform pre-treatment with equilibration buffer at >5 एमवी जब तक झिल्ली संतुलन तक नहीं पहुंच जाती।
5.3.2 नमूने को 0.22 μm फिल्टर के माध्यम से पूर्व-फ़िल्टर किए जाने के बाद, इसे कॉलम पर तब तक लोड करें जब तक कि पूरा नमूना लागू न हो जाए या क्रोमैटोग्राफी बाइंडिंग क्षमता तक न पहुंच जाए।
5.3.3 Flush with equilibration buffer at >10 एमवी जब तक यूवी सिग्नल बेसलाइन पर न गिर जाए।
5.3.4 डिज़ाइन किए गए प्रोटोकॉल के अनुसार ग्रेडिएंट या रैखिक क्षालन निष्पादित करें, और आवश्यकतानुसार अंश एकत्र करें।
5.4 सीआईपी पोस्ट-उपयोग उपचार - मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी डिवाइस सीआईपी
5.4.1 Set the feed flow rate to 5–10 MV/min and treat with 1 M NaOH at >10 एमवी जब तक कि यूवी सिग्नल बेसलाइन से नीचे न गिर जाए।
5.4.2 30 मिनट तक प्रसारित करने के बाद, पीएच 7-8 तक पहुंचने तक पानी से धोना शुरू करें, फिर 20% इथेनॉल पर स्विच करें और चालकता स्थिर होने तक धोना जारी रखें।
5.5, झिल्ली क्रोमैटोग्राफी भंडारण:
सीआईपी के उपयोग और पूरा होने के बाद, झिल्ली मॉड्यूल को अलग किया जा सकता है और 20% इथेनॉल में संग्रहीत किया जा सकता है, या 20% इथेनॉल में कमरे के तापमान पर ऑनलाइन रखा जा सकता है। इथेनॉल समाधान को समय-समय पर बदला और निरीक्षण किया जाना चाहिए।
6. आदेश देने की जानकारी
क्यू स्ट्रॉन्ग अनियन-एक्सचेंज मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी कैप्सूल फ़िल्टर
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लैब स्केल |
छोटे पैमाने पर |
पायलट स्केल |
उत्पादन का पैमाना |
|
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उत्पाद मॉडल |
IEXQ0002ES |
IEXQ0050ES |
IEXQ0400ES |
IEXQ5000ES |
|
झिल्ली की मात्रा |
0.2 मि.ली |
5 मि.ली |
400 मिलीलीटर |
5L |
लोकप्रिय टैग: क्यू मजबूत आयन झिल्ली क्रोमैटोग्राफी, चीन, आपूर्तिकर्ताओं, निर्माताओं, कारखाने, थोक, थोक, स्टॉक में, मुफ्त नमूना
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