सीएम कमजोर आयन-एक्सचेंज मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी

एसपी स्ट्रांग केशन एक्सचेंज मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी उत्पाद परिचय 

 

2. उत्पाद लाभ

तेज़ और कुशल उच्च बाइंडिंग क्षमता पारंपरिक रेज़िन क्रोमैटोग्राफी की तुलना में 40 गुना तेज़ प्रवाह दर पर प्राप्त की जा सकती है। पारंपरिक रेजिन आधारित क्रोमैटोग्राफी की तुलना में, झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करने की प्रक्रिया का समय 30-40 गुना कम किया जा सकता है। सामान्य परिचालन प्रवाह दर लगभग 10 एमवी/मिनट है।

2.2 उच्च बाइंडिंग दक्षता झिल्ली क्रोमैटोग्राफी कम दबाव ड्रॉप पर उच्च बाइंडिंग क्षमता और उच्च प्रवाह दर प्रदर्शित करती है, जिससे चार्ज किए गए बायोमोलेक्यूल्स को मॉड्यूल के माध्यम से एक ही पास में कैप्चर किया जा सकता है।

2.3 स्केलेबल और लचीला झिल्ली क्रोमैटोग्राफी उत्पादों की पूरी श्रृंखला बायोमोलेक्यूल शुद्धि की विविध आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है, जिसमें प्रक्रिया विकास से लेकर बड़े पैमाने पर उत्पादन तक के अनुप्रयोग शामिल हैं। कैप्सूल का डिज़ाइन एकल उपयोग की अनुमति देता है या उचित सफाई प्रक्रियाओं के बाद इसे साफ और पुन: उपयोग किया जा सकता है।

2.4 बेहतर उत्पादकता कॉम्पैक्ट डिज़ाइन सुविधा पदचिह्न को कम करता है। कॉलम पैकिंग, सफाई, सफाई सत्यापन और कॉलम भंडारण जैसे कार्यों को समाप्त करके, अपेक्षाकृत कम बफर के साथ सरल संतुलन के बाद प्रसंस्करण शुरू हो सकता है। चूंकि कॉलम पैकिंग, सफाई या भंडारण की कोई आवश्यकता नहीं है, इसलिए श्रम लागत को 50% से अधिक कम किया जा सकता है।

 

 

3 तकनीकी पैरामीटर

3.1 संरचनात्मक सामग्री

	लैब स्केल	छोटे पैमाने पर	पायलट स्केल	उत्पादन का पैमाना
झिल्ली की मात्रा	0.2 मि.ली	5 मि.ली	140 मि.ली	5L
झिल्ली समर्थन संरचना	polypropylene
झिल्ली आवास	polypropylene
हे अंगूठी	सिलिकॉन

3.2 परिचालन विशेषताएँ

	लैब स्केल	छोटे पैमाने पर	पायलट स्केल	उत्पादन का पैमाना
झिल्ली की मात्रा	0.2 मि.ली	5 मि.ली	400 मिलीलीटर	5L
अनुशंसित प्रवाह दर	1-6 मि.ली./मिनट	25-150 मि.ली./मिनट	2-12L/मिनट	25-150L/मिनट
अधिकतम परिचालन तापमान	35 डिग्री
अधिकतम परिचालन दबाव	3बार(25 डिग्री)
अधिकतम दबाव अंतर	3बार(25 डिग्री)
जमा करने की अवस्था	20% eथानोलaकतारबद्धsसमाधान

तुलना से पता चलता है कि एसपी झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का सेवा जीवन एसपी सेफ़रोज़ 6एफएफ के बराबर है।

चित्र 1. लाइसोजाइम के साथ परीक्षण किए गए एकाधिक उपयोगों के बाद एसपी झिल्ली क्रोमैटोग्राफी की बाइंडिंग क्षमता में परिवर्तन

इसके अलावा, हमने मेजबान कोशिका प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को हटाने में इसकी दक्षता के लिए झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का मूल्यांकन किया। परिणाम इस प्रकार हैं:

	डीएनए				एच.सी.पी
	आईजीजी रिकवरी	आरटी पीसीआर द्वारा सामग्री (आईजीजी का पीजी/मिलीग्राम)।		निष्कासन कारक	एलिसा द्वारा सामग्री (आईजीजी का एनजी/मिलीग्राम)।		निष्कासन कारक
दौड़ना	%	क्यू मेम्ब्रेन से पहले	Q झिल्ली के बाद	लकड़ी का लट्ठा	क्यू मेम्ब्रेन से पहले	Q झिल्ली के बाद	लकड़ी का लट्ठा
1	96.4	423	3.6	2.07	7	4.3	0.21
2	97.4	438	4.3	2.01	7	4.7	0.17
3	94.1	513	5.8	1.95	6	2.3	0.42
4	96.2	32	0.8	1.60	6	3.2	0.27
5	96.3	45	1.9	1.37	8	3.4	0.37
6	96.7	158	2.4	1.82	8	3.5	0.36
7	96.4	267	2.6	2.01	9	6	0.18
8	96.8	298	3.6	1.92	9	7	0.11
9	97.9	746	9.8	1.88	4	1.5	0.43
10	96.2	39	3.2	1.09	4	1.4	0.46

तालिका 1. सीएचओ में डीएनए और मेजबान सेल प्रोटीन हटाने की दरें - एसपी झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करके व्यक्त आईजीजी सामग्री

प्रयोगों की एक श्रृंखला ने प्रदर्शित किया कि एसपी झिल्ली क्रोमैटोग्राफी लक्ष्य आईजीजी की उच्च पुनर्प्राप्ति दर को बनाए रखते हुए प्रभावी ढंग से दूषित पदार्थों को हटा सकती है।

आयातित ब्रांडों के साथ गुडिलिंग एसपी झिल्ली क्रोमैटोग्राफी की तुलना करते समय, बाध्यकारी क्षमता डेटा इस प्रकार है:

बाइंडिंगcक्षमता (मिलीग्राम/एमएल)	Sartorius	कष्ट देना	मार्गदर्शन
लाइसोजाइम	25	32	29
ट्रिप्सिन	22	27	25

तालिका 2. हमारे उत्पाद और प्रतिस्पर्धी ब्रांडों में विभिन्न प्रोटीनों की बाइंडिंग क्षमता प्रदर्शन

समग्र मूल्यांकन से पता चलता है कि हमारी बाइंडिंग क्षमता आयातित उत्पादों के बराबर है।

चित्र 2. मानक के रूप में लाइसोजाइम का उपयोग करके एसपी मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल का बाइंडिंग क्षमता परीक्षण

गतिशील बाइंडिंग क्षमता और आयातित उत्पादों की तुलना में, यह पुष्टि की गई कि अधिकांश लक्ष्य प्रोटीन को तब कैप्चर किया जा सकता है जब लाइसोजाइम को 190 मिमी NaCl में मिलाया जाता है।

विभिन्न रेफरेंस स्थितियों के माध्यम से, हमने पाया कि झिल्ली क्रोमैटोग्राफी के रेफरेंस प्रोफाइल एग्रोस जेल के समान हैं, लेकिन विभिन्न नमक सांद्रता पर प्रोटीन की शुद्धता काफी भिन्न होती है। वास्तविक अनुसंधान एवं विकास और उत्पादन में, उच्च शुद्धता लक्ष्य प्रोटीन प्राप्त करने के लिए इष्टतम निक्षालन स्थितियों को मात्रात्मक रूप से निर्धारित करना आवश्यक है।

 

4 विशिष्ट अनुप्रयोग मामले

डीएनए, वायरस और मेजबान सेल प्रोटीन को हटाना

प्लास्मिड, वायरस, प्रोटीन को पकड़ना और ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स का शुद्धिकरण

यीस्ट किण्वन शोरबे से रंगद्रव्य को हटाना और उच्च क्षमता वाले प्रोटीन को ग्रहण करना

 

5 उपयोग प्रक्रिया

5.1 उपकरण की तैयारी और संयोजन:

5.1.1: रेजिन कॉलम के समान प्रक्रियाओं का पालन करते हुए एक ÄKTA क्रोमैटोग्राफी सिस्टम पर झिल्ली क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल स्थापित करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि प्रवाह दिशा मॉड्यूल के तीर और इनलेट अभिविन्यास के साथ संरेखित हो। सिस्टम में सुरक्षित एकीकरण के लिए मॉड्यूल को लुएर लॉक या क्लैंप{2}}स्टाइल फिटिंग का उपयोग करके कनेक्ट करें।

5.1.2 फ़ीड प्रवाह दर को इस पर सेट करें5-10 एमवी/मिनटऔर संतुलन बफर का उपयोग करके मॉड्यूल को डीगैस करें, यह सुनिश्चित करते हुए कि प्रवाह हवा के बुलबुले से मुक्त है। एक बार डीगैस हो जाने पर, पर्मेट आउटलेट को क्रोमैटोग्राफी सिस्टम से कनेक्ट करें।

5.2:पूर्व-उपचार का उपयोग करें:

5.2.1:

फ़ीड प्रवाह दर को इस पर सेट करें5-10 एमवी/मिनटऔर इसके साथ पूर्व -उपचार करें5 एमवी से अधिक के लिए 0.5 एम NaOH, यह सुनिश्चित करते हुए कि झिल्ली पूर्ण संतुलन तक पहुँच जाए।

5.2.2: समान प्रवाह दर पर, पूर्व उपचार करें5 एमवी से अधिक के लिए 1 एम NaClयह सुनिश्चित करने के लिए कि झिल्ली पूर्ण संतुलन तक पहुँच जाए।

5.3 क्रोमैटोग्राफी प्रक्रिया

5.3.1 फ़ीड प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और झिल्ली को 5 एमवी से अधिक के लिए संतुलन बफर के साथ संतुलित करें, जब तक कि झिल्ली पूर्ण संतुलन तक नहीं पहुंच जाती।

5.3.2 0.22 माइक्रोमीटर पूर्व निस्पंदन के बाद, नमूने को झिल्ली पर तब तक लोड करें जब तक कि नमूना लोडिंग पूरी न हो जाए या क्रोमैटोग्राफिक बाइंडिंग क्षमता तक न पहुंच जाए।

5.3.3 10 एमवी से अधिक के लिए संतुलन बफर के साथ धोएं जब तक कि यूवी सिग्नल बेसलाइन पर वापस न आ जाए।

5.3.4 प्रक्रिया डिजाइन के अनुसार ग्रेडिएंट इलुशन या चरणबद्ध इलुशन लागू करें, और आवश्यकतानुसार अंश एकत्र करें।

5.4 सीआईपी पोस्ट-उपयोग उपचार - झिल्ली क्रोमैटोग्राफी डिवाइस सीआईपी (स्थान पर सफाई)

5.4.1 फ़ीड प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और 10 एमवी से अधिक के लिए 1 एम NaOH के साथ सफाई करें, जब तक कि यूवी सिग्नल बेसलाइन से कम न हो जाए।

5.4.2 30 मिनट तक घूमने के बाद, पीएच 7-8 तक पहुंचने तक पानी से धोना शुरू करें, फिर 20% इथेनॉल से सफाई जारी रखें जब तक कि चालकता लगभग स्थिर न हो जाए।

5.5 झिल्ली क्रोमैटोग्राफी भंडारण

सीआईपी के उपयोग और समापन के बाद, झिल्ली मॉड्यूल को हटाया जा सकता है और 20% इथेनॉल में भिगोकर संग्रहीत किया जा सकता है, या इसे 20% इथेनॉल युक्त समाधान में कमरे के तापमान पर लाइन में संग्रहीत किया जा सकता है। 20% इथेनॉल समाधान का समय-समय पर निरीक्षण और प्रतिस्थापन किया जाना चाहिए।

 

6. आदेश देने की जानकारी

क्यू स्ट्रॉन्ग अनियन एक्सचेंज मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी कैप्सूल फ़िल्टर

	लैब स्केल	छोटे पैमाने पर	पायलट स्केल	उत्पादन का पैमाना
उत्पाद मॉडल	IEXQ0002ES	IEXQ0050ES	IEXQ0400ES	IEXQ5000ES
झिल्ली आयतन	0.2 मि.ली	5 मि.ली	400 मिलीलीटर	5L

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