डीईएई कमजोर अनियन एक्सचेंज मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी
डीईएई कमजोर आयन एक्सचेंज झिल्ली क्रोमैटोग्राफी - उत्पाद परिचय 1. अवलोकन डीईएई कमजोर आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी विभिन्न जैव अणुओं के चार्ज गुणों और चार्ज घनत्व में अंतर के आधार पर एक शुद्धिकरण तकनीक है। चूंकि अधिकांश बायोमैक्रोमोलेक्यूल्स में कार्यात्मक होते हैं...
उत्पाद का परिचय
डीईएई कमजोर अनियन एक्सचेंज मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी - उत्पाद परिचय
1. सिंहावलोकन
डीईएई कमजोर आयन एक्सचेंज क्रोमैटोग्राफी एक शुद्धिकरण तकनीक है जो विभिन्न जैव अणुओं के चार्ज गुणों और चार्ज घनत्व में अंतर पर आधारित है। चूंकि अधिकांश बायोमैक्रोमोलेक्यूल्स में कार्बोक्सिल या हाइड्रॉक्सिल समूह जैसे कार्यात्मक समूह होते हैं, इसलिए बफर समाधान के पीएच को संशोधित करके उनकी चार्ज विशेषताओं और परिमाण को समायोजित किया जा सकता है। बायोमोलेक्यूल्स को विपरीत रूप से चार्ज किए गए आयन या धनायन विनिमय माध्यम से बांधने के बाद, मोबाइल चरण की आयनिक शक्ति या पीएच को बदलकर पृथक्करण प्राप्त किया जाता है। कमजोर बंधन बंधुता वाले अणुओं को पहले निस्तारित किया जाता है, उसके बाद मजबूत बंधन बंधुता वाले अणुओं को, जिससे प्रभावी पृथक्करण पूरा होता है।
2. उत्पाद लाभ
2.1 उच्च दक्षता: राल आधारित क्रोमैटोग्राफी की तुलना में 40 गुना अधिक प्रवाह दर पर मजबूत बंधन प्राप्त करता है। पारंपरिक पैक्ड बिस्तर क्रोमैटोग्राफी की तुलना में, झिल्ली क्रोमैटोग्राफी समग्र प्रक्रिया समय को लगभग 30-40 गुना कम कर देती है।
2.2 उच्च बाइंडिंग दक्षता: मेम्ब्रेन क्रोमैटोग्राफी कम दबाव ड्रॉप के तहत उच्च बाइंडिंग क्षमता और उच्च प्रवाह दर प्रदर्शित करती है, जिससे चार्ज किए गए बायोमोलेक्यूल्स को कॉलम के माध्यम से एक ही पास में कैप्चर किया जा सकता है।
2.3 स्केलेबल और लचीला: झिल्ली क्रोमैटोग्राफी उत्पादों की पूरी श्रृंखला विविध बायोमैक्रोमोलेक्यूल शुद्धिकरण आवश्यकताओं को पूरा कर सकती है, जो प्रक्रिया विकास से लेकर बड़े पैमाने पर उत्पादन तक सभी चरणों को कवर करती है। कैप्सूल प्रकार का संरचनात्मक डिज़ाइन एकल उपयोग संचालन और सफाई के बाद पुन: उपयोग दोनों का समर्थन करता है।
2.4 बेहतर उत्पादकता: कॉम्पैक्ट डिज़ाइन सुविधा पदचिह्न को कम करता है। कॉलम पैकिंग, सफाई, सफाई सत्यापन और कॉलम भंडारण प्रक्रियाओं को समाप्त करके, सिस्टम को कॉलम पैकिंग या भंडारण के बिना बफर संतुलन के बाद सीधे संचालित किया जा सकता है। श्रम लागत को 50% तक कम किया जा सकता है।
3. तकनीकी पैरामीटर
3.1 संरचनात्मक सामग्री
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प्रयोगशाला पैमाना |
छोटे पैमाने पर |
पायलट स्केल |
उत्पादन का पैमाना |
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झिल्ली की मात्रा |
0.2 मि.ली |
5 मि.ली |
140 मि.ली |
5L |
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झिल्ली समर्थन संरचना |
पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) |
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झिल्ली आवास |
पॉलीप्रोपाइलीन (पीपी) |
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हे अंगूठी |
सिलिकॉन |
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3.2 परिचालन विशेषताएँ
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प्रयोगशाला पैमाना |
छोटे पैमाने पर |
पायलट स्केल |
उत्पादन का पैमाना |
|
|
झिल्ली की मात्रा |
0.2 मि.ली |
5 मि.ली |
400 मिलीलीटर |
5L |
|
अनुशंसित प्रवाह दर |
1-6 मि.ली./मिनट |
25-150 मि.ली./मिनट |
2-12L/मिनट |
25-150L/मिनट |
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अधिकतम परिचालन तापमान |
35 डिग्री |
|||
|
अधिकतम परिचालन दबाव |
3बार(25 डिग्री) |
|||
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अधिकतम अंतर दबाव |
3बार(25 डिग्री) |
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जमा करने की अवस्था |
20% इथेनॉल जलीय घोल |
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चित्र 1. बीएसए के साथ कई उपयोगों की निगरानी के बाद झिल्ली क्रोमैटोग्राफी लोडिंग क्षमता में परिवर्तन।
इसके अतिरिक्त, हमने DEAE झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करके मेजबान सेल प्रोटीन और न्यूक्लिक एसिड को हटाने की दक्षता का मूल्यांकन किया। परिणाम इस प्रकार हैं।
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डीएनए |
एच.सी.पी |
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आईजीजी रिकवरी |
आरटी पीसीआर द्वारा सामग्री (आईजीजी का पीजी/मिलीग्राम)। |
निष्कासन कारक |
एलिसा द्वारा सामग्री (आईजीजी का एनजी/मिलीग्राम)। |
निष्कासन कारक |
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दौड़ना |
% |
DEAE झिल्ली से पहले |
DEAE झिल्ली के बाद |
लकड़ी का लट्ठा |
DEAE झिल्ली से पहले |
DEAE झिल्ली के बाद |
लकड़ी का लट्ठा |
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1 |
96.7 |
423 |
3.5 |
2.08 |
7.8 |
5 |
0.19 |
|
2 |
97.4 |
438 |
6 |
1.86 |
7.7 |
4.9 |
0.20 |
|
3 |
94.7 |
513 |
8 |
1.81 |
6.3 |
1.9 |
0.52 |
|
4 |
95 |
32 |
2 |
1.20 |
6 |
4.2 |
0.15 |
|
5 |
96.3 |
45 |
6 |
0.88 |
8.1 |
5.2 |
0.19 |
|
6 |
96.5 |
158 |
3 |
1.72 |
8.7 |
6.2 |
0.15 |
|
7 |
96.4 |
267 |
2 |
2.13 |
9.8 |
7.1 |
0.14 |
|
8 |
96.8 |
298 |
7 |
1.63 |
9.4 |
8.2 |
0.06 |
|
9 |
97.1 |
746 |
5 |
2.17 |
4.3 |
2.6 |
0.22 |
|
10 |
96.6 |
39 |
2 |
1.29 |
4.4 |
1.7 |
0.41 |
तालिका 1. डीईएई झिल्ली क्रोमैटोग्राफी का उपयोग करके व्यक्त आईजीजी सीएचओ से डीएनए और मेजबान सेल प्रोटीन को हटाने की दर।
प्रयोगों की एक श्रृंखला ने प्रदर्शित किया कि क्यू झिल्ली क्रोमैटोग्राफी लक्ष्य आईजीजी की उच्च पुनर्प्राप्ति दर को बनाए रखते हुए, अशुद्धियों को प्रभावी ढंग से हटा सकती है।
इसके अलावा, हमने आयातित ब्रांडों के साथ गुडिलिंग झिल्ली क्रोमैटोग्राफी की तुलना की, और लोडिंग क्षमता डेटा इस प्रकार हैं।
चित्र 2. हमारी झिल्ली क्रोमैटोग्राफी और प्रतिस्पर्धी उत्पादों पर विभिन्न प्रोटीनों का प्रदर्शन लोड हो रहा है
समग्र मूल्यांकन से पता चलता है कि हमारी लोडिंग क्षमता आयातित उत्पादों के बराबर है।
चित्र 3. कोलेजन प्रोटीन परीक्षण में डीईएई झिल्ली क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल का प्रदर्शन
डीईएई झिल्ली क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल का उपयोग करते हुए, सत्यापन परिणामों से पता चला कि अधिकांश लक्ष्य कोलेजन प्रोटीन को 135 मिमी NaCl का उपयोग करके पकड़ा और निकाला जा सकता है।
विभिन्न निक्षालन स्थितियों के तहत परीक्षण के माध्यम से, हमने पाया कि झिल्ली क्रोमैटोग्राफी और एगरोज़ जेल क्रोमैटोग्राफी समान निक्षालन व्यवहार प्रदर्शित करती है, जहां विभिन्न नमक सांद्रता के तहत प्रोटीन की शुद्धता काफी भिन्न होती है। व्यावहारिक अनुसंधान एवं विकास और उत्पादन में, उच्च शुद्धता लक्ष्य प्रोटीन प्राप्त करने के लिए इष्टतम संतुलन निक्षालन स्थितियों को मात्रात्मक रूप से निर्धारित करना आवश्यक है।
4. क्लासिक अनुप्रयोग मामले
डीएनए, वायरस, मेजबान कोशिका प्रोटीन और एंडोटॉक्सिन को हटाना
प्लास्मिड, वायरस, न्यूक्लिक एसिड और प्रोटीन को पकड़ना, साथ ही ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स का शुद्धिकरण
5. ऑपरेटिंग वर्कफ़्लो
5.1:उपकरण की तैयारी और संयोजन
5.1.1 झिल्ली क्रोमैटोग्राफी मॉड्यूल को AKTA क्रोमैटोग्राफी सिस्टम पर पैक्ड रेजिन कॉलम के समान तरीके से स्थापित किया जाना चाहिए, यह सुनिश्चित करते हुए कि प्रवाह दिशा तीर और इनलेट दिशा के साथ संरेखित है। लुएर कनेक्टर या क्लैंप फिटिंग का उपयोग करके कनेक्ट करें।
5.1.2 इनलेट प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और हवा को शुद्ध करने के लिए संतुलन बफर का उपयोग करें। तब तक फ्लश करना जारी रखें जब तक आउटलेट पर कोई बुलबुले न दिखें, फिर पर्मेट आउटलेट को क्रोमैटोग्राफी सिस्टम से कनेक्ट करें
5.2:पूर्व {{0}उपयोग उपचार
5.2.1: इनलेट प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और यह सुनिश्चित करने के लिए कि झिल्ली संतुलन तक पहुंच जाए, 5 एमवी से अधिक के लिए 0.5 एम NaOH के साथ पूर्व-उपचार करें।
5.2.2: समान प्रवाह दर के तहत, यह सुनिश्चित करने के लिए कि झिल्ली संतुलन तक पहुंच जाए, 5 एमवी से अधिक के लिए संतुलन बफर (1× पीबीएस) के साथ आगे पूर्व-उपचार करें।
5.3 क्रोमैटोग्राफी प्रक्रिया
5.3.1
इनलेट प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और झिल्ली के संतुलन तक पहुंचने तक 5 एमवी से अधिक के लिए संतुलन बफर के साथ पूर्व-व्यवहार करें।
5.3.2
नमूने को 0.22 माइक्रोमीटर फ़िल्टर के माध्यम से पूर्व-फ़िल्टर किए जाने के बाद, नमूने को तब तक लोड करें जब तक कि लोडिंग पूरी न हो जाए या क्रोमैटोग्राफी लोडिंग क्षमता तक न पहुँच जाए।
5.3.3
10 एमवी से अधिक के लिए संतुलन बफर के साथ धोएं जब तक कि यूवी अवशोषण बेसलाइन स्तर तक कम न हो जाए।
5.3.4
प्रक्रिया डिज़ाइन के अनुसार ग्रेडिएंट रेफरेंस या रैखिक रेफरेंस का उपयोग करें, और आवश्यकतानुसार अंशों में नमूने एकत्र करें।
5.4,सीआईपी पोस्ट-उपयोग उपचार - झिल्ली क्रोमैटोग्राफी उपकरण का सीआईपी
5.4.1
इनलेट प्रवाह दर को 5-10 एमवी/मिनट पर सेट करें और 10 एमवी से अधिक के लिए 0.5 एम NaOH के साथ जगह (सीआईपी) में सफाई करें जब तक कि यूवी अवशोषण बेसलाइन से नीचे न गिर जाए।
5.4.2
30 मिनट तक धोने के बाद, जब तक पीएच 7-8 के बीच न हो जाए तब तक पानी से धोना शुरू करें, फिर 20% इथेनॉल से सफाई जारी रखें जब तक कि चालकता लगभग स्थिर न रहे।
5.5, झिल्ली क्रोमैटोग्राफी भंडारण:
सीआईपी के उपयोग और पूरा होने के बाद, झिल्ली मॉड्यूल को हटाया जा सकता है और 20% इथेनॉल में भिगोकर संग्रहीत किया जा सकता है, या 20% इथेनॉल समाधान में कमरे के तापमान पर ऑनलाइन संग्रहीत किया जा सकता है। 20% इथेनॉल समाधान का समय-समय पर निरीक्षण और प्रतिस्थापन किया जाना चाहिए।
6.आदेश देने की जानकारी
DEAE-कमजोर आयन एक्सचेंज झिल्ली क्रोमैटोग्राफी कैप्सूल फ़िल्टर टाइप करें
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प्रयोगशाला-पैमाना |
छोटे पैमाने पर |
पायलट पैमाना |
उत्पादन का पैमाना |
|
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उत्पाद मॉडल |
IEXD0002ES |
IEXD0050ES |
IEXD0400ES |
IEXD5000ES |
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झिल्ली की मात्रा |
0.2 मि.ली |
5 मि.ली |
400 मिलीलीटर |
5L |
लोकप्रिय टैग: डीईई कमजोर आयन एक्सचेंज झिल्ली क्रोमैटोग्राफी, चीन, आपूर्तिकर्ता, निर्माता, फैक्टरी, थोक, थोक, स्टॉक में, मुफ्त नमूना
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