पुनः संयोजक प्रोटीन को व्यक्त करने वाले खमीर के स्पष्टीकरण और अल्ट्राफिल्ट्रेशन के लिए एक कुशल और कम लागत वाली प्रक्रिया
बहिर्जात जीन की यीस्ट अभिव्यक्ति से न केवल पुनः संयोजक प्रोटीन और पेप्टाइड्स, एंटीबॉडी और टीके, साइटोकाइंस, वृद्धि कारक, हार्मोन और अन्य जैवसक्रिय पदार्थ उत्पन्न हो सकते हैं, बल्कि इसका उपयोग औद्योगिक एंजाइम, कार्यात्मक खाद्य पदार्थ और जैविक सामग्री के उत्पादन के लिए भी किया जा सकता है, जिसकी अनुप्रयोग संभावनाएं व्यापक हैं।
यीस्ट एक्सप्रेशन सिस्टम में दो सामान्य रूप से इस्तेमाल की जाने वाली एक्सप्रेशन सिस्टम शामिल हैं, यानी सैकरोमाइसिस सेरेविसिया एक्सप्रेशन सिस्टम और मीथेनोट्रोफिक यीस्ट एक्सप्रेशन सिस्टम। मेथनॉल यीस्ट एक्सप्रेशन सिस्टम वर्तमान में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की जाने वाली यीस्ट एक्सप्रेशन सिस्टम है, और पिचिया सबसे अधिक इस्तेमाल की जाने वाली है, जो कार्बन और ऊर्जा के रूप में मेथनॉल का उपयोग कर सकती है। इसके अलावा, हैनसेन यीस्ट, स्फेरोइड्स इत्यादि भी हैं।
कोई फर्क नहीं पड़ता कि किस प्रकार की खमीर अभिव्यक्ति प्रणाली है, इसकी डाउनस्ट्रीम पृथक्करण और शुद्धिकरण प्रक्रियाएं समान हैं, और विशिष्ट प्रक्रिया प्रवाह एक उदाहरण के रूप में पुनः संयोजक प्रोटीन और पॉलीपेप्टाइड दवाओं की खमीर अभिव्यक्ति लेता है।
गाइडलिंग माइक्रोफिल्ट्रेशन मेम्ब्रेन कैसेट ओपन फ्लो चैनल और टेंगेंशियल फ्लो फिल्ट्रेशन मोड को अपनाता है, जो यीस्ट किण्वन तरल और ई. कोली क्रैकिंग तरल जैसे जटिल फीड लिक्विड को उच्च गति पर प्रभावी ढंग से संसाधित कर सकता है, और छोटे परीक्षण से लेकर उत्पादन पैमाने तक रैखिक प्रवर्धन सुनिश्चित कर सकता है। कॉम्पैक्ट मॉड्यूलर डिज़ाइन, सरल पाइपलाइन कनेक्शन, सिस्टम की स्वतंत्रता और पठनीयता ऑपरेटरों की सुरक्षा कर सकती है और जैविक प्रदूषण को रोक सकती है। और कोई रखरखाव और सफाई सत्यापन नहीं। इसलिए, यह प्रारंभिक डाउनस्ट्रीम प्रसंस्करण के स्पष्टीकरण चरण के लिए बहुत उपयुक्त है।
यूएफ/डीएफ प्रक्रिया का मुख्य उद्देश्य अशुद्धियों को हटाना और बफर्स को विस्थापित करना है। गाइडलिंग अल्ट्राफिल्ट्रेशन मेम्ब्रेन कैसेट में मेम्ब्रेन पोर साइज़ की अच्छी समरूपता और मजबूत हाइड्रोफिलिसिटी होती है, जो मेम्ब्रेन को उच्च फ्लक्स और कम प्रोटीन सोखना दे सकती है, और छोटे दबाव ड्रॉप, आसान सामग्री स्थानांतरण और काफी कम निस्पंदन समय के साथ अनुकूलित प्रवाह चैनल डिज़ाइन दे सकती है। इसके अलावा, उत्पाद श्रृंखला विभिन्न पैमानों के विभिन्न अनुप्रयोगों की जरूरतों को पूरा करने के लिए पूर्ण और लचीली है। इसलिए, यह डाउनस्ट्रीम प्रसंस्करण के यूएफ/डीएफ चरण के लिए बहुत उपयुक्त है।
गाइडलिंग झिल्ली का अनुप्रयोग मामला निम्नलिखित हैकैसेटपुनः संयोजक प्रोटीन की खमीर अभिव्यक्ति में।
माइक्रोफिल्ट्रेशन स्पष्टीकरण
हमने माइक्रोफ़िल्ट्रेशन द्वारा 1.5L यीस्ट किण्वन तरल (लक्ष्य प्रोटीन आणविक भार 42-55 KD) को स्पष्ट करने के लिए {{0}}.11 वर्ग मीटर 0.22μm छिद्र झिल्ली कैसेट का उपयोग किया। माइक्रोफ़िल्ट्रेशन की पूरी प्रक्रिया में, लक्ष्य प्रोटीन की पुनर्प्राप्ति दर, मैलापन परिवर्तन और झिल्ली प्रवाह कमी की जाँच की गई।
0-17 मिनट सांद्रता प्रक्रिया है, 17-32 मिनट धुलाई और निस्पंदन प्रक्रिया है। पूरी माइक्रोफ़िल्ट्रेशन प्रक्रिया के दौरान, TMP धीरे-धीरे बढ़ता गया, तरल इनलेट गति अपरिवर्तित रही, और औसत सामग्री प्रवाह 45LMH था।
माइक्रोफिल्ट्रेशन से पहले तरल की गंदलापन 600NTU थी और माइक्रोफिल्ट्रेशन के बाद 8NTU थी, और गंदलापन में स्पष्ट रूप से परिवर्तन हुआ।
परिणामों से पता चला कि लक्ष्य प्रोटीन की उपज > 90% थी। गाइडलिंग टेक्नोलॉजी 0.22μm झिल्ली कैसेट स्थिर है और इस अनुप्रयोग परिदृश्य के लिए उपयुक्त है।
अल्ट्राफिल्ट्रेशन सांद्रता
1.5 लीटर स्पष्ट तरल (लक्ष्य प्रोटीन आणविक भार 42-55kd) की अल्ट्राफिल्ट्रेशन सांद्रता 10kd झिल्ली कैसेट के 0.11 वर्ग मीटर का उपयोग करके की गई। अल्ट्राफिल्ट्रेशन की पूरी प्रक्रिया में, लक्ष्य प्रोटीन की रिकवरी दर, झिल्ली प्रवाह कमी और जल प्रवाह वसूली दर की जांच की गई।
उपयोग से पहले और बाद में, झिल्ली की पुनर्प्राप्ति दर 90% तक पहुंच सकती है।
0-15 मिनट सांद्रता प्रक्रिया है, 15-18 मिनट तरल विनिमय प्रक्रिया है। संपूर्ण अल्ट्राफिल्ट्रेशन प्रक्रिया के दौरान, TMP धीरे-धीरे बढ़ता गया, तरल इनलेट गति अपरिवर्तित रही, और औसत सामग्री प्रवाह 50LMH था।
परिणामों से पता चला कि लक्ष्य प्रोटीन पूरी तरह से फंस गया था। गाइडलिंग टेक्नोलॉजी 10kd झिल्ली कैसेट स्थिर रूप से चल सकता है और इस अनुप्रयोग परिदृश्य के लिए उपयुक्त है।
खमीर द्वारा व्यक्त अधिकांश पुनः संयोजक प्रोटीन अत्यधिक व्यक्त नहीं थे। फ़िल्टर्ड तरल की मैलापन स्पष्ट रूप से कम हो गई थी और प्रोटीन की पुनर्प्राप्ति दर अधिक थी। क्योंकि बाद में क्रोमैटोग्राफ़िक समय बहुत लंबा है, यह प्रोटीन पर प्रतिकूल प्रभाव डालेगा, क्रोमैटोग्राफ़िक नमूना समय को छोटा करने के लिए, अल्ट्राफ़िल्ट्रेशन सांद्रता का एक चरण जोड़ा जा सकता है, और नमूना के बाद लक्ष्य प्रोटीन को जल्दी से केंद्रित किया जा सकता है, जो समय बचाने, भराव की मात्रा को कम करने और इस प्रकार उत्पादन लागत को कम करने के उद्देश्य को प्राप्त कर सकता है।
गाइडलिंग टेक्नोलॉजी माइक्रोफिल्ट्रेशन मेम्ब्रेन कैसेट आम तौर पर फीड लिक्विड की मैलापन को 20NTU से कम कर सकते हैं, जो बाद के अल्ट्राफिल्ट्रेशन और क्रोमैटोग्राफी की जरूरतों को पूरी तरह से पूरा करता है। अल्ट्राफिल्ट्रेशन मेम्ब्रेन कैसेट की अल्ट्राफिल्ट्रेशन रिकवरी दर अलग-अलग सामग्रियों के कारण अलग-अलग होगी, सामान्य रिकवरी दर 90-95% तक पहुंच सकती है।
गाइडलिंग टेक्नोलॉजी संबंधित मूल्यांकन के लिए परीक्षण किट का अनुरोध करने के लिए आपका स्वागत करती है।
गाइडलिंग के बारे में
गाइडलिंग टेक्नोलॉजी एक राष्ट्रीय उच्च तकनीक उद्यम है जो बायोफार्मास्युटिकल्स, सेल कल्चर, बायोमेडिसिन के शुद्धिकरण और सांद्रता, निदान और औद्योगिक तरल पदार्थों पर ध्यान केंद्रित करता है। हमने सफलतापूर्वक केन्द्रापसारक फ़िल्टर डिवाइस, अल्ट्राफिल्ट्रेशन और माइक्रोफिल्ट्रेशन कैसेट, वायरस फ़िल्टर, TFF सिस्टम, डेप्थ फ़िल्टर, खोखले फाइबर आदि विकसित किए हैं। जो बायोफार्मास्युटिकल्स, सेल कल्चर आदि के अनुप्रयोग परिदृश्यों को पूरी तरह से पूरा करते हैं। हमारी झिल्लियाँ और झिल्ली फ़िल्टर व्यापक रूप से प्री-फ़िल्ट्रेशन, माइक्रोफ़िल्ट्रेशन, अल्ट्राफ़िल्ट्रेशन और नैनोफ़िल्ट्रेशन की सांद्रता, निष्कर्षण और पृथक्करण में उपयोग किए जाते हैं। हमारी कई उत्पाद लाइनें, छोटे, एकल-उपयोग प्रयोगशाला निस्पंदन से लेकर उत्पादन निस्पंदन प्रणाली, बाँझपन परीक्षण, किण्वन, सेल संस्कृति और बहुत कुछ, परीक्षण और उत्पादन की जरूरतों को पूरा करती हैं। गाइडलिंग टेक्नोलॉजी आपके साथ सहयोग करने के लिए तत्पर है!